一、消毒方法
目前，常用的消毒方法多采用物理方法(如干熱法、濕熱法、過(guò)濾法、射線法等)和化學(xué)方法(消毒劑、抗生素)兩大類。
1.干熱法
是利用恒溫干燥箱內(nèi)160℃～170℃的高熱，并保持90～120分鐘，殺死細(xì)菌和芽孢，達(dá)到目的的一種方法。主要適用于不便在壓力蒸汽器中進(jìn)行，且不易被高溫?fù)p壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的。用此方法的物品干燥，易于貯存。酒精燈火焰燒灼法也是屬于干熱的方法之一，在進(jìn)行微生物檢測(cè)工作時(shí)，常須利用工作臺(tái)面上的酒精燈火焰對(duì)金屬器具及玻璃器皿口緣進(jìn)行補(bǔ)充。
2.濕熱法
壓力蒸汽濕熱法是目前常用的一種方法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環(huán)境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而使微生物死亡。適合于布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和培養(yǎng)基的。高壓蒸汽器的蒸汽壓力一般調(diào)整為0.10-0.11MPa，維持20～30min即可達(dá)到效果。
3.射線法
利用紫外線燈進(jìn)行照射的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機(jī)制是通過(guò)對(duì)微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。適合于實(shí)驗(yàn)室空氣、地面、操作臺(tái)面。時(shí)間為30min。用紫外線時(shí)應(yīng)注意，不能邊照射邊進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，因?yàn)樽贤饩€不僅對(duì)人體皮膚有傷害，而且對(duì)培養(yǎng)物及一些試劑等也會(huì)產(chǎn)生不良影響。
4.過(guò)濾法
是將液體或氣體通過(guò)有微孔的濾膜過(guò)濾，使大于濾膜孔徑的細(xì)菌等微生物顆粒阻留，從而達(dá)到的方法。過(guò)濾法大多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養(yǎng)基等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過(guò)濾，或用玻璃細(xì)菌濾器、濾球負(fù)壓過(guò)濾。濾膜孔徑應(yīng)在0.22～0.45μm范圍內(nèi)或用更小的細(xì)菌濾膜，溶液通過(guò)濾膜后，細(xì)菌和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻，并利用濾膜的吸附作用，阻制小于濾膜孔徑的細(xì)菌透過(guò)。
5.化學(xué)消毒劑消毒法
用于那些不能利用物理方法進(jìn)行的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實(shí)驗(yàn)器皿等。常用的化學(xué)消毒劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%～75%乙醇、過(guò)氧乙酸、來(lái)蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環(huán)氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)材料的；利用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸法進(jìn)行無(wú)菌室和培養(yǎng)室的消毒。在使用時(shí)應(yīng)注意安全，特別是用在皮膚或?qū)嶒?yàn)材料上的消毒劑，須選用合適的藥劑種類、濃度和處理時(shí)間，才能達(dá)到安全和的目的。
6.抗生素抑菌法
主要用于培養(yǎng)基，是培養(yǎng)過(guò)程中預(yù)防微生物污染的重要手段以及作為微生物污染不嚴(yán)重時(shí)的“急救”措施。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素和新霉素等。
二、不同種類物品及培養(yǎng)物的消毒方法
1.無(wú)菌操作室
由于無(wú)菌操作室的污染來(lái)源主要是空氣中的細(xì)菌和真菌孢子，因此長(zhǎng)期停用后的無(wú)菌操作室應(yīng)進(jìn)行熏蒸，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進(jìn)行無(wú)菌室的。經(jīng)常使用的無(wú)菌操作室，在每次使用前都應(yīng)進(jìn)行地面衛(wèi)生清潔，并用紫外線燈照射30min，進(jìn)行空氣。對(duì)超凈工作臺(tái)，每次操作前用紫外燈照射30min，然后用70%～75%酒精擦拭。
2.培養(yǎng)液
培養(yǎng)液在制備過(guò)程中帶有各種雜菌，分裝后應(yīng)立即，至少也應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)完成工序。目前常用過(guò)濾法除去培養(yǎng)物操作液和培養(yǎng)液中的細(xì)菌?；?qū)ε囵B(yǎng)液中耐熱組分先進(jìn)行高壓蒸汽，然后在無(wú)菌室加入經(jīng)過(guò)過(guò)濾的不耐熱溶液，混勻后分裝備用。
使用高壓蒸汽器時(shí)，將分裝好的培養(yǎng)液放入底部有一定量(淹沒(méi)加熱管)涼水的高壓蒸汽器內(nèi)，增壓至0.035~0.040 MPa時(shí)排凈器內(nèi)冷空氣，以便使蒸汽能到達(dá)各個(gè)消毒部位，保證消毒徹底。然后繼續(xù)加壓加熱，當(dāng)壓力表讀數(shù)達(dá)到0.10~0.11MPa為121℃，保持15~20min即可。由于消毒效果取決于溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長(zhǎng)的消毒時(shí)間是必須的。
在121℃的蒸汽溫度下可以很快殺死各種細(xì)菌及高度耐熱的芽孢桿菌，因此許多培養(yǎng)液的消毒壓力、溫度一般保持在0.10~0.11MPa、121℃。消毒時(shí)間與需要消毒的培養(yǎng)液量密切相關(guān)(表1)，時(shí)間不足達(dá)不到效果，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)培養(yǎng)液內(nèi)的一些化學(xué)物質(zhì)遭到破壞，影響培養(yǎng)液成分。消毒結(jié)束后，關(guān)閉熱源，只有當(dāng)器內(nèi)壓力降為零時(shí)才能打開(kāi)放氣閥，排除剩余蒸汽，取出培養(yǎng)液。不可在壓力較高時(shí)打開(kāi)放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養(yǎng)液組成中如含有遇熱易分解的物質(zhì)，則需用過(guò)濾方法消毒。首先對(duì)培養(yǎng)液中耐熱組分進(jìn)行高壓蒸汽后放置在無(wú)菌場(chǎng)所，固體培養(yǎng)液在40℃左右瓊脂即將凝結(jié)前，加入經(jīng)過(guò)過(guò)濾的不耐熱溶液，混勻后冷卻備用。